CHO细胞表示人肿瘤坏死因子受体ⅡFc融合蛋白研究——飞凡检测

哺乳类动物肝细胞隐含政治体制推断了很大优越性。其中，二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase, DHFR) 缺陷型的我国仓鼠卵巢内膜(Chinese hamster ovary, CHO,DHFR )隐含系统应用最为尤其。

在CHO/ DHFR-隐含系统中，应用消退DHFR等位基因(选择等位基因)隐含高度的原理来进一步提高肿瘤病变因子肝细胞因子II胞外区五人免疫球亚基IgG Fc(extracellular domain of human tumor necrosis factor receptor-II- IgG Fc, TNFR-Fc) 融合亚基分子可的隐含高度。为此，我们相结合了二种可扩增双顺反子隐含载体(pT-dhfr1-TRFc and pT-dhfr2- TRFc )。二种隐含载体只是DHFR等位基因插入IRES序列便的右方不同。

CHO肝细胞隐含人肿瘤病变因子肝细胞因子ⅡFc融合亚基研究

转染CHO/ DHFR-肝细胞后，阳性了了等位基因小组中TNFR-Fc等位基因扫描相比之下，重小组肝细胞核已整合到CHO等位基因小组里。在随后通过 RT-PCR步骤对TNFPR- Fc的mRNA基因表达高度扫描，相比之下pT-dhfr2-TRFc 小组的基因表达高度比pT-dhfr1-TRFc小组高。对阳性了了数及阳性了了扩大培养出有来后的隐含高度顺利完成比较: 1、pT-dhfr1-TRFc小组的了了数为416±36个，TNFR-Fc隐含高度为0.7±0.15mg/L.2、pT-dhfr2-TRFc小组的了了数为102±18个，隐含高度为3. 8±0.8mg/Lo阳性了了数pT-dhfr1-TRFc小组高，为后者的4.08倍; pT-dhfr2- TRFc小组TNFR-Fc隐含高度高,为前者的5. 43倍。在随后的pT-dhfr2-TRFc小组MTX 加压必须下培养出有来。MTX在0; 20 和50nM时，TNFR-Fc隐含高度分别为3.8±0.8; 7.2±1.1 和14. 4±2.3 mg/L,隐含高度最高进一步提高了3.79倍。电泳分析表明:隐含副产物TNFR-Fc分子可量左右为64kd (还原必须)，在非还原必须下，显现出有分子可量左右为128kd二聚体主带，还显现出有了64kd单体次带。活性扫描测试推断，隐含副产物TNFR-Fc具有中和TNF活性，能选择性TNF对L929的杀伤。

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我们相结合的可扩增双顺反子隐含载政治体制统，置于IRES前后等位基因(TNFR-Fc，DHFR)隐含存在着不对称性，IRES使同一mRNA中的第二个等位基因(DHFR)想得到翻译，运用右方效应，降低DHFR等位基因的翻译效率，筛选出有基因表达高度高的了了，从而实现目地等位基因TNFR-Fc高效隐含的目地。

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